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使用實時熒光PCR試劑盒時的注意事項有哪些?

瀏覽次數(shù):25發(fā)布日期:2026-02-02
  實時熒光PCR試劑盒能夠檢出單拷貝的靶標DNA或RNA,即使樣本中的目標序列含量極低,也能通過多輪擴增產(chǎn)生足夠強的熒光信號被檢測到。這使得它在微量核酸的定量需求方面表現(xiàn)出色,如新冠病毒核酸檢測中,即使在感染初期病毒載量較低的情況下,也能準確檢測出病毒的核酸。
 
  高特異性:試劑盒中的引物和探針是根據(jù)目標基因的特殊序列精心設(shè)計的,只有當引物正確地與目標序列兩端互補配對,并且內(nèi)部的熒光探針與擴增產(chǎn)物中的特定區(qū)域緊密結(jié)合時,才會產(chǎn)生熒光信號。這種高度準確的設(shè)計確保了檢測結(jié)果只針對目標基因,大大減少了非特異性擴增和假陽性結(jié)果的出現(xiàn)概率。
 
  準確量化:通過Ct值與標準曲線的線性關(guān)系,可準確測定起始拷貝數(shù),誤差小于±0.5個數(shù)量級。定量范圍寬,可在較廣的濃度范圍內(nèi)進行準確的定量分析,滿足不同樣本類型和檢測需求。
 
  多重檢測能力:搭配不同熒光通道(如FAM/SYBR/HEX等),可在同一反應(yīng)管中同步檢測多個靶基因,適用于多病原體聯(lián)合篩查等復(fù)雜檢測場景,提高了檢測效率,降低了成本。
 
  使用實時熒光PCR試劑盒時的注意事項:
 
  1.儲存條件
 
  -溫度控制:該試劑盒通常需要在低溫環(huán)境下儲存,以保持其活性和穩(wěn)定性。具體儲存溫度應(yīng)根據(jù)試劑盒說明書的建議進行設(shè)定,通常為2-8℃或-20℃。
 
  -避免光照:熒光探針易受光照影響,導(dǎo)致熒光強度降低。因此,在儲存和使用過程中,應(yīng)避免強光照射,建議在暗處操作。
 
  -避免反復(fù)凍融:該試劑盒中的成分易受反復(fù)凍融的影響,導(dǎo)致活性降低。因此,在使用過程中,應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融。
 
  -有效期限:注意檢查試劑盒是否過期,以確保實驗結(jié)果的準確性。
 
  2.操作規(guī)范
 
  -遵循說明書:嚴格按照試劑盒說明書的操作步驟進行實驗,以確保實驗結(jié)果的可靠性。
 
  -試劑準備:在進行實驗前,確保所有試劑都已準備好,并在使用過程中保持試劑的冷卻狀態(tài)。
 
  -樣品處理:對樣品進行充分的處理,以確保樣品中的RNA或DNA質(zhì)量,并去除可能的污染物。
 
  -設(shè)備校準:在使用前對熒光定量PCR儀進行校準,以確保實驗結(jié)果的準確性。
 
  -實驗過程監(jiān)控:在實驗過程中實時監(jiān)控熒光信號的強度,以確保實驗的順利進行。
實時熒光PCR試劑盒
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